当前位置:乐鱼app官网入口-乐鱼官网入口 > 技术文章 > ezsep™ c18固相萃取柱用于水产品中氯霉素的检测
前言:
氯霉素类抗生素可作用于细菌核糖核蛋白体的50s亚基,而阻挠蛋白质的合成,属抑菌性广谱抗生素,能够用于人体某些疾病的治疗,以及作为兽药用于防范及治疗动物疾病。在日常生活中氯霉素等激素类药物会广泛应用于养殖业,例如鱼、虾等水产类食品,养殖户为了所养殖的鱼、虾能够快速生长,并且不生病,会放很多抗生素类药物到养殖的水中,从而造成药物在动物体内及动物体表富集,而人类食用这些肉类会使兽药残留进入人体,从而影响身体健康。
本文参照《gb 31658.2-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》,利用ezseptmc18固相萃取柱(1000 mg/6ml,货号:pz10304)进行净化,再用高效液相色谱串联质谱检测进行检测,建立了一种对水产品中氯霉素的分析方法。
关键词:
水产品,氯霉素,固相萃取,
1, 实验过程
1.1 仪器与试剂
spe1000 全自动固相萃取系统,北京莱伯泰科仪器股份有限公司;
m64高通量平行浓缩仪,北京莱伯泰科仪器股份有限公司;
4500质谱系统,sciex公司;
ezseptmc18固相萃取柱(1000 mg/6ml,货号:pz10304),北京莱伯帕兹检测科技有限公司;
冷冻离心机,gl-20g-ⅱ,上海安亭科学仪器厂 ;
甲醇(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;
乙腈(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;
正己烷(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;
乙酸乙酯(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;
氯化钠(分析纯),购自国药集团化学试剂有限公司。
1.2 工作液配制
氯霉素标准储备液:100μg/ml,溶剂为甲醇,购自坛墨质检标准物质中心 。
氯霉素-d5标准储备液:100μg/ml,溶剂为甲醇,购自坛墨质检标准物质中心 。
标准中间液:移取氯霉素储备液和氯霉素-d5标准储备液各0.1ml,分别用甲醇稀释至10ml容量瓶中,配制成浓度为1.0μg/ml的氯霉素标准中间液及氯霉素-d5同位素标准中间液。
标准使用液:移取氯霉素中间液和氯霉素-d5标准中间液各1ml,分别用甲醇稀释至10ml容量瓶中,配制成浓度为0.1μg/ml的氯霉素标准使用液及氯霉素-d5同位素标准使用液。
分别移取0.1μg/ml的氯霉素标准使用液0、0.01、0.05、0.10、0.20、0.50ml分别置于10ml容量瓶中并加入氯霉素-d5同位素标准使用液0.2 ml以纯水定容至刻度,标准浓度为0 μg/l、0.1 μg/l、0.5 μg/l、1 μg/l、2μg/l、5μg/l, 氯霉素-d5浓度固定为2μg/l。
1.3 实验部分
1.3.1 样品制备
取鱼肉5g,加氯霉素-d5同位素标准使用液0.2 ml、乙腈5ml、4%氯化钠溶液5ml,涡旋振荡2min,4000r/min离心10min,取上清液,残渣重复提取1次,合并上清液。加正己烷5ml,涡旋振荡1min,2000r/min离心10min,弃去上层液,正己烷重复处理1次。加水饱和的乙酸乙酯溶液5ml,涡旋振荡1min,2000r/min离心10min,上层液转移到20ml上样瓶中,重复提取1次,合并提取液,氮气吹干,加3ml5%乙腈水溶液溶解,混匀,备用待净化。
1.3.2 固相萃取净化
ezseptmc18固相萃取柱(1000 mg/6ml,货号:pz10304)用10ml甲醇、10ml水依次进行活化,取1.3.1待净化液上样,上样结束后用3ml、3ml水淋洗萃取柱,再用4ml 50%甲醇水溶液洗脱萃取柱,收集洗脱液,加水饱和乙酸乙酯4ml,涡旋振荡1min,2000r/min离心5min,取上层液,重复处理1次,合并上层溶液,氮气吹至近干干。加1ml 50%甲醇水溶液溶解,混匀过微孔滤膜后供lc-ms/ms测定。
1.3.3 lc-ms/ms仪器条件
色谱柱:shim-pack velox c18(2.7μm,2.1*100mm);
检测方式:多反应监测(mrm);
流动相:a:水-b: 甲醇(50:50);
流速:0.2ml/min;
进样量:1μl;
2, 实验结果
图1 标液色谱图
图2氯霉素标准曲线图
3, 结论
本次实验展示了使用ezseptmc18固相萃取柱(1000 mg/6ml,货号:pz10304)对水产品中氯霉素进行净化,通过高效液相色谱串联质谱进行测定,其加标回收率在84.7%~105.2%之间,rsd在8.1%,能够满足标准要求。说明ezseptmc18固相萃取柱(1000 mg/6ml,货号:pz10304)能很好的完成方法中的净化工作,并且结果稳定、可靠。
4, 参考文献
1. 《gb 31658.2-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》
表 1 加标回收率结果
回收率(%) | 均值 | rsd | |||||||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | % | % | ||||
1.0 | 86.3 | 84.7 | 101.3 | 100.9 | 93.5 | 105.2 | 95.3 | 8.1 |